Barvení (biologie)

Barvení je biochemická metoda, kterou se přidá k substrátu specifická barvící látka (barvivo) a slouží v biologii na prokázání výskytu (kvalifikaci) nebo množství (kvantifikaci) specifické látky ve zkoumané tkáni nebo v pletivu, nebo k obarvení celých struktur a objektů, které zlepšuje nebo umožňuje jejich pozorování optickým mikroskopem.

Užívaná barviva

abecedně:

• bismarckova hněď
• karmín – barví jádra červeně, extrakt ze samiček červce nopálového (Coccus cacti), nepřebarvuje, dříve využíván v embryologických studiích pro barvení celých bloků tkání.
• Coomassie
• DAPI
• eosin
• Erie garnet = direct red 10
• etidium bromid
• fenolová červeň
• hematoxylin
• Hoechstovo barvivo
• jód
• jádrová červeň „Kerlechtrot“ – barví jádra červeně, v roztoku síranu hlinitého
• Kongo červeň = Congo red = direct red 28 – barví amyloid červeně
• krystalová violeť
• kyselina pikrová (2,4,6-trinitrofenol) – barví cytoplazmu buněk a svaly žlutě
• kyselý fuchsin – kolagenní vlákna červeně
• Luciferová žluť – fluorescenční barvivo
• malachitová zeleň
• methylová zeleň
• methylová modř
• neutrální červeň
• nilská modř
• nilská červeň = Nile blue oxazone – barví tukové kapénky červeně
• olejová červeň = oil red O – barví tuk červeně
• rhodamin
• safranin
• saturnová červeň (sirius red F3B, direct red 80, F3B 200, C. I. No. 35780, CAS No. 2610-10-8) – azobarvivo, kolagenní vlákna barví červeně, případně barvení amyloidu
• irius red 4B = direct red 79 = L4B 200 – azobarvivo
• šafrán – barví kolagen, extrakt z blizen šafránu setého
• Weigertův železitý hematoxylin = Weigert's Iron Hematoxylin – barví chromatin v jádrech šedě nebo temně hnědě (modročerně až hnědočerně)

Barvicí metody

Existuje mnoho detailně rozpracovaných barvících metod, z nejvýznamnějších je možné uvést:

Barvení mukopolysacharidů

Mukopolysacharidy se barví směsí PAS, alciánové modři a hematoxylinu, a to tímto postupem:

1. odparafínování: xylen 1 (5 min.), xylen 2 (5 min.), alkohol 1 (5 min.), alkohol 2 (5 min.), oplach v destilce
2. kyselina jodistá 0,5 % 5 minut
3. praní vodou 2–3 min, oplach destilovanou vodou
4. Schiffovo reagens 20–30 min
5. tekoucí voda 10 min., oplach destilovanou vodou
6. alciánová modř (před použitím se doporučuje přefiltrovat) 1-2 hod.
7. oplach vodou
8. hematoxylin 5 min.
9. praní 20 min., oplach destilovanou vodou, oplach absolutním alkoholem, xylen 3 (5 min.), xylen 4 (5 min.), montování

Výsledek:

• neutrální mukopolysacharidy a glykogen – červeně
• kyselé mukopolysacharidy – modrozeleně
• jádra – modře hematoxylinem

Barvení kolagenních vláken

Kolagenní vlákna je možné barvit za použití saturnové červeni a Weigertova železitého hematoxylinu:

1. odparafínování: xylen 1 (5 min.), xylen 2 (5 min.), alkohol 1 (5 min.), alkohol 2 (5 min.)
2. důkladně proprat ve vodě
3. Weigertův železitý hematoxylin (roztok A + roztok B 1 : 1) 5 min. nebo gallocyanin 24 hod.
4. praní v tekoucí vodě 5–10 min.
5. saturnová červeň 1–20 min. (10 ml 1 % roztoku saturnové červeně + 90 ml nasyceného roztoku kys. pikrové)
6. několikrát oplach v absolutním alkoholu, xylen 3, xylen 4, montování

Výsledek:

• kolagenní vlákna – červeně
• svalovina – žlutě (pouze pokud je v saturnové červeni také kyselina pikrová)
• jádra – hematoxylinem

Barvení elastických vláken

(orcein + hematoxylin)

1. odparafínování: xylen 1 (5 min.), xylen 2 (5 min.), alkohol 1 (5 min.), alkohol 2 (5 min.), oplach v destilované vodě
2. orcein 6-8 hod. při teplotě 38-40 °C
3. oplach destilovanou vodou
4. oplach kyselým alkoholem 70 %
5. praní ve vodě
6. hematoxylin 5 min.
7. praní 20 min., oplach destilovanou vodou, oplach absolutním alkoholem, xylen 3, xylen 4, montování

Výsledek:

• elastická vlákna – červenohnědě (elastické vazivo (žluté vazy obratlů, vazy hrtanu), elastická chrupavka (ušní boltec, epiglottis))

Giemsovo barvení

Gramovo barvení

Základní barvící metoda v mikrobiologii. Barvíme fixovaný preparát.

1. krystalová violeť na 20s – oplach ve vodě
2. Lugolův roztok na 20s – oplach ve vodě
3. aceton – odbarvení (dokud odtéká barva z preparátu)
4. Karbolfuchsin na 20s – oplach ve vodě.

Externí odkazy

• Obrázky, zvuky či videa k tématu barvení na Wikimedia Commons

Metody:

• Metody histologického studia (PDF dokument)
• Odběr materiálu pro histologické vyšetření Archivováno 30. 5. 2020 na Wayback Machine. (textový dokument DOC)

Barviva:

• přehled barviv (anglicky)